一、ABI7900熒光定量PCR儀是繼7700、5700型熒光定量PCR儀之后，ABI公司推出的高通量實(shí)時熒光定量PCR系統(tǒng)。它是兼容96孔板和384孔板的熒光定量PCR儀，也是可選手工進(jìn)樣和自動進(jìn)樣的熒光定量PCR儀。7900HT型熒光定量PCR儀可滿足從中通量到高通量實(shí)驗(yàn)的需求。  

二、ABI7900熒光定量PCR儀主要特點(diǎn):  

（1）高效平臺-7900HT系統(tǒng)是為支持高通量而構(gòu)建的，光學(xué)系統(tǒng)經(jīng)優(yōu)化以適用于384孔板熒光信號的激活和實(shí)時檢測。  

（2）結(jié)果可靠-7900HT系統(tǒng)采用了與7700、5700相同的定量原理，利用Ct值（Ct定義為在基線上方產(chǎn)生可檢測到的統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的熒光發(fā)射的這一PCR循環(huán)）和起始拷貝數(shù)的對應(yīng)關(guān)系，通過外標(biāo)準(zhǔn)曲線精確計(jì)算未知樣品的起始拷貝數(shù)。  

（3）高度重現(xiàn)性-7900HT系統(tǒng)的熒光檢測發(fā)生在PCR對數(shù)期的起始，因此反應(yīng)管中各組分沒有任何限制反應(yīng)因素，從而確保檢測結(jié)果都是精確并能重復(fù)的。  

（4）先進(jìn)的熒光檢測技術(shù)-RISM®7900HT熒光定量PCR系統(tǒng)在不降低速度、分辨率的情況下有效提高了產(chǎn)率，這是基于先進(jìn)的熒光檢測技術(shù)：一束激光掃描并激活384個孔的每一個孔里的熒光染料，熒光信號通過光柵分光，經(jīng)過分離的多色熒光同時到達(dá)CCD攝像機(jī)，實(shí)現(xiàn)多色熒光同時檢測。  

（5）自動進(jìn)樣裝置-7900HT系統(tǒng)配備有自動化配件可取得高效率。自動化裝置可容納84塊384孔板，機(jī)械手臂可按一定順序?qū)⒋郎y樣品板運(yùn)送至主機(jī)內(nèi)，配備的條形碼閱讀器（Barcodereader）可自動識別進(jìn)入主機(jī)的樣品板編號，使你在任何時間可以在樣品行列中插入或替代樣品板。  

（6）多樣的化學(xué)試劑-7900HT型熒光定量PCR儀上可使用的化學(xué)試劑包括TaqMan熒光探針法和SYBRGreen熒光染料法。TaqMan探針法具有高度的靈敏度和特異性，適用于實(shí)時定量的多重反應(yīng)或單核苷酸多態(tài)性分析（SNP）。SYBRGreen染料應(yīng)用于目標(biāo)鑒定（篩選測定）或者在只需用少數(shù)幾個反應(yīng)的測定中為理想。  

（7）有效防污染-7900HT系統(tǒng)在PCR全過程中使用專門設(shè)計(jì)的和始終密閉的樣品管。在加入樣品和試劑后這些管子便立即封閉并在擴(kuò)增和檢測過程中保持這種狀態(tài)，這樣就可以大大地減少污染的機(jī)會；此外，7900HT系統(tǒng)不存在PCR后處理，有效防止擴(kuò)增產(chǎn)物對實(shí)驗(yàn)環(huán)境的污染而造成的假陽性。  

（8）多種定量方法-ABIPRISM®7900HT序列檢測系統(tǒng)軟件為基因表達(dá)提供一種定量化方法。定量是從一個標(biāo)準(zhǔn)曲線上直接測定目標(biāo)（基因）的量。相對定量方法是通過與標(biāo)定樣品相比較而計(jì)算未知樣品的量，不需要標(biāo)準(zhǔn)曲線。  

三、原理介紹：  

1.定量，為了測定未知樣品中的目標(biāo)（基因）的數(shù)量，7900HT系統(tǒng)可用來測定樣品的CT，然后用一條標(biāo)準(zhǔn)曲線來測定起始的拷貝數(shù)。在標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制中，7900HT系統(tǒng)軟件首先用已知的起始拷貝數(shù)的幾種稀釋度計(jì)算它們的CT值。接著，軟件使用測得的CT值對應(yīng)于起始拷貝數(shù)的對數(shù)值作圖。至少在五個數(shù)量級范圍中兩者呈線性關(guān)系。  

2.相對定量，對于基因表達(dá)研究來說，相對定量是理想的方法。這里不是應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)曲線而是相對于標(biāo)定樣品計(jì)算表達(dá)水平。用一個內(nèi)源對照來標(biāo)定樣品的量。這一方法與7900HT系統(tǒng)在一個多重反應(yīng)中能同時對目標(biāo)和內(nèi)源對照進(jìn)行定量測定的能力相結(jié)合，可實(shí)現(xiàn)高效、高通量的基因表達(dá)研究。  

3.有效的SNP檢測手段，除實(shí)時定量測定以外，7900HT系統(tǒng)包括對于已知的單一核苷酸多態(tài)性（SNPS）作大規(guī)模篩選的軟件。在一對等位基因系統(tǒng)中，用對應(yīng)于兩個等位基因的兩個TaqMan探針在同一個試管中做多重PCR反應(yīng)。反應(yīng)終止時所產(chǎn)生的熒光用7900HT系統(tǒng)進(jìn)行測定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過分析軟件迅速取得。  

四、儀器規(guī)格和技術(shù)指標(biāo):  

（1）系統(tǒng)組成，7900HT熒光定量PCR儀－384孔或96孔可更換式半導(dǎo)體控溫PCR儀，488nm長壽氬離子激光器，X,Y雙軸同步熒光掃描頭。  

（2）光柵和CCD檢測裝置，自動進(jìn)樣裝置，DELLGX270電腦，Windows2000操作系統(tǒng)，儀器控制，數(shù)據(jù)采集及結(jié)果分析軟件，PrimerExpress引物探針設(shè)計(jì)軟件。  

（3）大產(chǎn)率，實(shí)時定量檢測－5000樣品/天（標(biāo)準(zhǔn)模式），96樣品/35分鐘（快速模式），終點(diǎn)SNP分析－30000樣品/2.5小時。  

（4）裝機(jī)指標(biāo)，以99.7%的置信度明確區(qū)分濃度差別兩倍（5000和10000拷貝）的樣品的定量結(jié)果試劑和消耗品。  

（5）完備的通用基本試劑盒和消耗品，十二萬種TaqmanGeneExpressionAssays人、大鼠、小鼠基因組基因表達(dá)分析試劑盒，二百萬種TaqmanValidatedSNPGenotypingAssays人、大鼠、小鼠基因組SNP檢測試劑盒。  

（6）Taqman低密度表達(dá)譜芯片，CustomAssays代客設(shè)計(jì)、合成引物探針服務(wù)。